摘 要
目的 观察阿斯美对慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠模型支气管肺泡灌洗液(BALF)的肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、转化生长因子β(TGF-β)和白细胞总数及分类的影响,探讨其对COPD的抗炎作用。
方法 采用气管内注入脂多糖及熏香烟法建立大鼠COPD模型(COPD组),制作模型同时给予3个不同剂量(3 mg、9 mg、27 mg/日)的阿斯美 (阿斯美治疗组)和泼尼松(0.25 mg/日,泼尼松治疗组)进行治疗,采用ELISA法检测BALF的TNF-α、TGF-β、IL-1β和IL-6,对BALF细胞涂片进行姬姆萨染色并行白细胞计数和分类。
结果 与COPD组相比,阿斯美治疗组的TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β、白细胞总数及分类显著减少(P<0.01),不同剂量阿斯美治疗组的组间比较未显示显著差异(P>0.05)。泼尼松治疗组的TNF-α、IL-1β、巨噬细胞与COPD组比较无显著降低(P>0.05),而白细胞总数及中性粒细胞分类显著降低(P<0.01)。
结论 阿斯美对COPD的气道炎症有抑制作用。
慢性阻塞性肺病(COPD)是一种慢性气道炎症。已有的研究表明,多种细胞因子如TNF-α、IL-6、IL-1β、TGF-β、IL-8在COPD的气道炎症和气道重构中起重要作用,故抗炎治疗为COPD的治疗方法之一。阿斯美是一种复方制剂,具有良好的支气管解痉作用,常用于缓解支气管哮喘和COPD的咳、痰、喘症状。有关阿斯美在COPD中的抗炎作用研究较少。我们通过建立大鼠COPD模型,观察阿斯美对TNF-α、IL-6、IL-1β和TGF-β等细胞因子水平及BALF的白细胞计数的影响,试图探讨其对COPD气道炎症反应的作用。
材料与方法
材料 大鼠TNF-α、IL-6、IL-1β、TGF-β ELISA试剂盒为美国Biosource公司产品,脂多糖(LPS)由美国Sigma公司生产,阿斯美为由氨茶碱(25 mg)、盐酸甲氧苯丙甲胺(12.5 mg)、那可丁(7 mg)和扑尔敏(2 mg)组成的复方制剂,由上海三共制药有限公司生产。每粒阿斯美胶囊含100 mg粉剂,与蒸馏水混合制成混悬液灌胃。
实验动物与分组 雄性Wistar大鼠(复旦大学上海医学院实验动物部提供)48只,体重(200±10)g,随机分为6组,每组8只:(1)正常对照组:不做任何干预。(2)COPD组:第1、14天气管内注入脂多糖(LPS)350 μg/200 μl,第2~13天、15~28天在密闭隔离器内熏大前门牌香烟,每天上午1次,每次2小时。(3)COPD+阿斯美治疗组1:按COPD组方法建立COPD模型,第2~13天、15~28天每天上午以阿斯美混悬液3 mg/只灌胃。(4)COPD+阿斯美治疗组2:按COPD组方法建立COPD模型,但每天以阿斯美混悬液9 mg /只灌胃。(5)COPD+阿斯美治疗组3:按COPD组方法建立COPD模型,但每天以阿斯美混悬液27 mg /只灌胃。(6)COPD+强的松治疗组:按COPD组方法建立COPD模型,第2~13天、15~28天每天以泼尼松0.25 mg/只灌胃。
支气管肺泡灌洗及细胞计数 第29天以氯胺酮麻醉和腹主动脉放血法处死大鼠,分离结扎右主支气管,经左主支气管行左肺支气管肺泡灌洗。用生理盐水5 ml分3次灌洗,回收率80%~90%,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),计数细胞总数,然后,将灌洗液以1500 rpm离心5分钟,取上清液置于-80℃保存,测定细胞因子;取少量沉淀物涂片行BALF细胞分类计数。细胞涂片经瑞氏姬姆萨染色,显微镜下计数200个细胞,进行细胞分类。
BALF的细胞因子测定 用双抗体夹心ABC-ELISA法测定TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6,按试剂盒要求操作。Bradford法(德国Eppendorf Biophotometer)行BALF蛋白定量,各细胞因子测得值用BALF的蛋白含量进行校正。
统计学分析 应用SPSS 10.0统计软件进行统计学分析,实验数据以均数±标准差表示,对照组与模型组比较采用t检验,模型组与各治疗组间比较采用Dunnett检验,阿斯美治疗组的组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。
结 果
各组大鼠BALF的白细胞计数及分类见表1。COPD组与正常对照组相比,COPD组大鼠BALF的白细胞总数、中性粒细胞和巨噬细胞含量明显增高(P<0.01);各阿斯美治疗组与COPD组相比,白细胞总数及分类计数均降低(P<0.01);阿斯美治疗组组间比较差异无显著性(P>0.05);泼尼松治疗组与COPD组相比,白细胞总数及中性粒细胞降低(P<0.01),巨噬细胞无降低(P>0.05)。
各组大鼠BALF的细胞因子测定见表2。COPD组与正常对照组相比,COPD组大鼠BALF的TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6含量显著增高(P<0.01);各阿斯美治疗组与COPD组相比,TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6含量明显下降,差异有显著性(P<0.01);阿斯美治疗组组间比较各细胞因子差异无显著性(P>0.05);泼尼松治疗组与COPD组相比,TNF-α、IL-1β差异无显著性(P>0.05)。
讨 论
由于炎症因子对COPD发病起重要作用,故抗炎治疗为治疗COPD的重要方法。
本实验显示,激素对COPD大鼠的主要前炎症因子TNF-α、IL-1β无抑制作用;但激素治疗组的白细胞总数及中性粒细胞分类较模型组降低,而巨噬细胞分类无降低。这些结果表明,激素可在一定程度上抑制中性粒细胞而减轻气道炎症,但不能完全阻断炎症反应。
茶碱是治疗COPD的常用药物,除了可以通过多个环节扩张支气管平滑肌外,还有抑制炎症和免疫调节的作用。已有研究表明,茶碱能通过提高细胞内的CAMP浓度而显著抑制肥大细胞、单核细胞和肺泡巨噬细胞释放IL-1β、TNF-α、LTB4、IL-2。
我们的实验表明,阿斯美治疗组和COPD模型组相比,BALF中的TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β、中性粒细胞及巨噬细胞水平明显降低,说明阿斯美可通过阻断炎症因子网络的多个环节抑制COPD气道炎症。阿斯美中除氨茶碱外,扑尔敏亦具有抑制气道炎症反应的作用。已有研究表明,抗组胺药在以嗜酸细胞浸润为主的气道炎症反应中能下调气道上皮细胞的活性,抑制黏附分子的表达和炎症介质的释放。我们认为,阿斯美的抗炎作用可能为两药协同作用所致。
我们的实验还表明,3个不同剂量阿斯美治疗组对炎症反应的抑制作用无差异,也就是说,只要使用含小剂量氨茶碱的阿斯美即能发挥抗炎作用,这为阿斯美临床使用时同时具有有效性和安全性提供了理论依据。阿斯美治疗COPD不仅具有良好的支气管解痉作用,减少常规剂量氨茶碱的不良反应,更重要的是,它可以通过抑制炎症反应而减轻肺部损伤。故根据本实验结果,阿斯美可作为控制COPD慢性炎症的药物之一。 作者:转载 资料来自:来自互联网 |
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